>> Вируси
1. Какви свойства правят живи организми?
2. Какво Нуклеинова киселинати знаеш?
3. Какви са функциите на нуклеиновите киселини?
Вируси (от латински вирус - отрова) нямат клетъчна структура.
Те представляват най -простата формаживот на нашата планета, заемащ гранична позиция между неживата и живата материя.
Вирусите се различават от неживата материя по две свойства: способността да възпроизвеждат подобни форми за себе си (да се размножават) и притежаването на наследственост и променливост.
Вирусите са подредени много просто. Всяка вирусна частица се състои от РНК или ДНК, затворени в протеинова обвивка, наречена капсид (фиг. 16).
Прониквайки в клетката, вирусът променя своя метаболизъм, насочвайки цялата си дейност към производството на вирусна нуклеинова киселина и протеини... Самосглобяването на вирусни частици от синтезирани молекули и протеини на нуклеинова киселина се случва вътре в клетката. До момента на смъртта огромен брой вирусни частици имат време да бъдат синтезирани в клетката. В крайна сметка клетката умира, мембраната й се спуква и вирусите напускат клетката гостоприемник (фиг. 17).
Като се заселват в клетките на живите организми, вирусите причиняват много опасни заболявания: при хората - грип, едра шарка, морбили, полиомиелит, паротит, бяс, СПИН и много други; при растенията - мозаечно заболяване на тютюн, домати, краставици, усукване на листа, джуджета и др .; при животни - шап, чума по свинете и птиците, инфекциозна анемия на коне и др.
Вируси. Capsid.
1. Каква структура имат вирусите?
2. На какво основание вирусите се класифицират като живи организми?
3. Какви характеристики отличават вирусите от другите живи организми?
Каменски А. А., Криксунов Е. В., Пасечник В. В. Биология 9 клас
Изпратено от читателите от уебсайта
Откривателят на вируси, основателят на вирусологията е руският учен Дмитрий Йосифович Ивановски, открил вируса на тютюневата мозайка (TMV) през 1892 г.
Вирусите са толкова различни от микроорганизмите, че са изолирани в специално царство - царството Вира.
Характеристики на вирусите, които ги отличават от всички други живи същества:
1) наличието само на един вид нуклеинова киселина - ДНК или РНК, докато клетките на всички останали живи същества съдържат ДНК и РНК, чието взаимодействие е необходимо за биосинтеза на протеини;
2) липсата на собствени протеин-синтезиращи системи и клетъчна структура;
4) повсеместност (разпространена навсякъде);
5) са с микроскопичен размер.
Извънклетъчната форма на вируса - вирионът и вирусът в клетката на гостоприемника - са две различни форми на вируса.
Вириони различни вирусиимат размери от 15 до 400 нанометра. Нанометърът е 10 -9 метра (фиг. 6). Най -малките вируси - вируси на полиомиелит - имат вирион 17-25 nm, средно - грипен вирус - 80-120 nm, голям - вирус на едра шарка - 300-400 nm.
В центъра на вириона е неговият геном. Това е нуклеинова киселина-ДНК или РНК (едноверижна или двуверижна). Плюс-едноверижната РНК има две функции: наследствена и информационна, например при вируса на полиомиелит. Минус едноверижна РНК, както например при грипния вирус, носи само наследствена функция и само по време на размножаването на вируса към нея се добавя плюс-веригата на иРНК.
Протеиновите молекули са симетрично разположени около нуклеиновата киселина - капсомери, които съставляват капсида (лат. Capsa - кутия). Разграничават се между спираловиден тип симетрия, когато капсомерите са положени по цялата дължина на молекулата на нуклеиновата киселина, и кубични, когато капсомерите са подредени под формата на двадесетстранен (икосаедър).
Вирионите имат затруднения организирани вирусиима и повърхностна обвивка - суперкапсид, съдържащ освен протеини и въглехидрати, липиди и компоненти на клетката гостоприемник. Структурата на вириона е в основата на класификацията на вирусите. Според вида на нуклеиновата киселина те се разделят на: рибовируси и дезоксирибовируси, след това според структурата на вирионите, според мястото на размножаване и други характеристики, се извършва разделяне на семейства и родове.
Поради малкия си размер вирусите не се виждат под светлинен микроскоп. Само най -големият от тях - вирусът на едра шарка - може да се наблюдава под формата на малки точкови образувания - елементарните тела на Пашен.
Възпроизвеждайки се в чувствителни клетки на тялото, вирусите на едра шарка, бяс, грип образуват в тях вътреклетъчни включвания. Те могат да бъдат намерени в светлинен или флуоресцентен микроскоп. Откриването на вътреклетъчни включвания се използва за диагностика. Например, при бяс се намират включвания Babesha-Negri в нервните клетки.
Морфологията на вирионите се изучава в електронен микроскоп. Вирусите имат различни форми: сферични, нишковидни, пръчковидни.
Методи за отглеждане на вируси:
1. Инфекция на животни (интраперитонеално, интравенозно, интрамускулно, интраназално, инфекция в мозъка и други)
2. На пилешки ембриони след заразяването им върху хориона - алантоидната мембрана, в алантоичната кухина, в околоплодната кухина, в жълтъчния сак.
3. За културата на клетки от различни тъкани.
Тъканната култура е тъканни клетки, отглеждани извън тялото на специална хранителна среда... Тъканните клетки при изкуствени условия запазват присъщия си метаболизъм и чувствителност към определени вируси. Най -подходящите за отглеждане на вируси са клетки с бърз растеж и висок метаболизъм. По тази причина ембрионалните тъкани (фибробласти пилешки ембриони, човешки амнионни клетки и др.), както и култури от туморни тъкани. Култивирането на клетки от тъканна култура се извършва в специални колби (колби - матрици, колби на Carrel и др.) И в епруветки. Клетъчната култура за растеж трябва да има някакъв вид опора, например стъклена плоча, стена от тръба. В отглежданата тъканна култура, която покрива съдовата стена или стъклена плоча под формата на еднослоен клетъчен слой, материалът, съдържащ вируса, се инокулира. Работата се извършва при стерилни условия. За да се потисне растежа на друга микрофлора (с изключение на вируси), съдържащият вирус материал се обработва предварително с антибиотици, по-често с пеницилин и стрептомицин. Размножаването на вируса в клетките се определя от цитопатичното действие (CPE): в резултат на размножаването на вируса в клетките, микроскопията разкрива включвания, дегенеративни промени и в крайна сметка клетките умират. Тъй като растежът на клетките спира, ph на средата се променя малко в сравнение с контролата (клетки без вирус). В това отношение цветът на средата също не се променя. Хранителната среда за тъканна култура може да бъде различни разтвори, чийто състав е близък до състава на телесните течности (синтетична среда 199, физиологичен разтвор на Ханкс със серум, лакталбумин хидролизат със серум и други). В момента във вирусологичната практика честонанесете прясно клетъчна култура (първични или първични - трипсинизирани) и непрекъснати култури (линии) от клетки.
Първично - трипсинизирани клетъчни култури се приготвят от органи на възрастни животни (по -често от бъбреците на маймуни и други животни) и човешки ембриони, пилешки фибробласти чрез трипсинизиране на парчета тъкан, последвано от култивиране в хранителна среда. За тази цел парчета тъкан се натрошават с ножица (или по друг начин), след което се промиват с буферен разтвор на Ханкс за отстраняване на кръвта и се третират с 0,25 - 0,3% трипсинов разтвор. Трипсин разрушава междуклетъчните мостове и освобождава клетките. С помощта на камерата Горяев се преброява броят на клетките, разредени до концентрация от 400 хиляди клетки в 1 мл. Получената суспензия от клетки се излива в епруветки, плътно затворени със стерилни гумени запушалки и се поставят в термостат при 37 ° C в почти хоризонтално положение (под ъгъл 50 °) в специални стелажи. След 3-4 дни върху стената на епруветката се образува непрекъснат слой от умножени клетки. Епруветките с добър растеж на тъканите се подбират за вирусна инфекция.
Трансплантируемите клетъчни култури (растящи) са стабилни клетъчни линии, които са преминали извън тялото в продължение на много години. Те се получават от злокачествени тумори и от нормални (ембрионални) тъкани на хора и животни. Те включват: 1) линия Hela - човешки клетки на цервикалния карцином; 2) линия Hep - 2 - клетки на злокачествен тумор на човешкия ларинкс; 3) Детройтска линия - 6 - клетки, изолирани от костния мозък на човек с рак на белия дроб; 4) линии А - 0 и А - 1 - човешки амнионни клетки; 5) линия SOC - сърдечни клетки на маймуна cynomolgus и други.
Полуприсадените или диплоидни клетъчни култури са човешки тъканни клетки, които запазват диплоиден набор от хромозоми по време на преминаването. Човешките диплоидни клетки не претърпяват злокачествена трансформация и по този начин се сравняват благоприятно с туморните клетки.
Наличието на геном, заобиколен от протеинова обвивка. Разположен на ръба на живота. Характеристика : задължителен паразитизъм върху генетичния апарат на живите клетки и наличието на нуклеинова киселина в генома само от тип 1. Вирусите могат да се въведат нова информацияв генетичния апарат на клетката гостоприемник.
Вирусите са своеобразна форма на живот, която има всички свои характеристики:
1) способността да се възпроизвежда;
2) наследственост - способността да се предават основните свойства на потомците;
3) генетична променливост;
4) адаптация към конкретен хост;
5) способността да причинява инфекция, да се размножава в клетката гостоприемник;
6) вирусният геном функционира според общите закони на генетичния код.
Вирусите принадлежат на жив , но те не могат да се нарекат орг-мами.Разлики от живите системи:
1) малък размер;
2) много проста структура на вириона - геномът (ДНК или РНК) и капсидът (протеинова обвивка);
3) без клетъчна структура - без цитоплазма, мембрани, рибозоми (без енергийна мобилизация и протеинов синтез);
4) вирионът има само 1 вид нуклеинова киселина - ДНК или РНК;
5) не е способен на растеж и бинарно делене;
7) са в състояние да комбинират своя геном с генома на клетката гостоприемник;
8) не може да съществува без клетка гостоприемник;
9) може да има фрагментиран геном.
10) Размножават се, като се възпроизвеждат от собствената си геномна нуклеинова киселина.
Вироиди - се състоят само от малки молекули на РНК ( 300-400 нуклеотиди).
Приони - инфекциозни протеинови частици, водещи до развитие на фатални неврологични заболявания.
Вирионът е пълноценна вирусна частица, състояща се от нуклеинова киселина и капсид, разположена извън жива клетка.
Нуклеокапсидът се състои от nuc to - you и протеинова обвивка, т.е. капсид.
Симетричен тип - начин на пространствено опаковане на капсомери спрямо NC и др. (Спирални, кубични, смесени).
1) Спирално - нишковидни вируси - протеинови субединици са подредени в спирала, а между тях NK. Защитава NK по -добре, но изисква голямо количествопротеин, отколкото кубичен.
2) Кубичен - в основата различни комбинацииравностранни триъгълници, образувани от комбинация от сферични протеинови субединици. Когато се комбинират, те могат да образуват затворена сферична повърхност. Икосаедите имат 20 лица, най -често се срещат 12 върха, т.к най -ефективната и икономична симетрия.
Суперкапсидът е външната обвивка на сложно организирани вируси, състояща се от два слоя липиди (СМ на клетката гостоприемник) и затворени в тях гликозилирани суперкапсидни вирусни протеини, които стърчат над повърхността на вириона под формата на своеобразни бодли. Шиповете изпълняват функции: разпознават клетъчни рецептории се свързват с тях, осигуряват сливането на вирусната мембрана с мембраната на клетката и нейните лизозоми, насърчават разпространението на вируса в организма поради сливането на клетките, имат свои собствени защитни антигени.
3. Критерии за класификация на вирусите.
1) NC: вид, брой нишки, процент, молекулно тегло, съдържание на гуанин и цитозин.
2) Морфология: вид симетрия, брой капсомери, наличие на външна липопротеинова мембрана, форма, размер на вирионите.
3) Биофизични свойства: константа на утаяване, плувна плътност.
4) Протеини: количеството на структурните протеини и тяхната локализация, както и техният състав.
5) Липиди
6) Размножаване в тъканни култури: характеристики на репликация.
7) Обхватът на засегнатите гостоприемници: особености на патогенезата инфекциозен процес; онкогенна св-ва.
8) Устойчивост на физични и химични фактори (гама лъчи, термично инактивиране при 37 и 5 О C, действие на мастни разтворители и отделни катиони).
9) Антигенен sv-va.
4. Видове вирусни геноми.
РНК геноми
1) Едноверижна единична РНК с матрична активност (положителна РНК) - вирус на полиомиелит
2) Едноверижна единична РНК без матрична активност (отрицателна РНК). Вирионът има транскриптаза - парамиксовируси, рабдовируси.
3) Едноверижна фрагментирана РНК без матрична активност (отрицателна РНК). Вирион има транскриптаза - ортомиксовирус.
4) Двуверижна фрагментирана РНК. Вирион има транскриптаза - реовируси.
5) Вируси, чийто геном е представен от две идентични нишки на положителна РНК (диплоиден геном). Вирионите имат транскриптаза - ретровируси.
ДНК геноми
1) Едноверижна линейна ДНК - парвовируси.
2) Едноверижна кръгова ДНК - фаги
3) Двуверижна линейна ДНК - херпесен вирус.
4) Двуверижна кръгова ДНК - паповавируси, хепетит В вирус.
5) Двуверижна ДНК с ковалентно свързан терминален хидрофобен протеин - аденовируси.
6) Двуверижна ДНК, затворена във всеки край от ковалентна връзка - вирус на едра шарка.
5. Методи за култивиране на вируси.
Вирусите не растат на хранителни среди, а се размножават само вътреклетъчно.
Употреба: инфекция на лабораторни животни, пилешки ембриони, тъканни култури.
6. Методи за раждане на животни. Правила, методи.
Интраперитонеална, интравенозна, интрамускулна, интраназална, мозъчна инфекция и др.
Инфекция в мозъка. При работа с невротропни вируси. Най -често се заразяват бели мишки. Челната кост се пробива с туберкулинова спринцовка.
7. Инфекция на пилешки ембриони. Правила, методи.
· На хорионната мембрана
· В алонтоичната кухина
· В амниотичната кухина
· В жълтъчния сак
Използвайте ембриони на възраст 5-11 дни. Преди заразяване проверете жизнеспособността и дефиницията на въздушната камера и местоположението на ембриона. Мястото на масата, където се извършват манипулациите, е покрито със салфетка, потопена в разтвор на хлорамин.
8. Култури на клетки (тъкани). Определение, класификация, получаване.
Тъканната култура е тъканни клетки, отглеждани извън тялото върху специална хранителна среда. Ембрионалните тъкани са широко използвани (фибробласти от пилешки ембриони, клони на човешки амниони, туморни клетки, тъй като те растат бързо.
9. Признаци на размножаване на вируса в клетъчната култура.
Наличието и възпроизвеждането на вируса в клетката може да се прецени по цитопатичния ефект - клетъчна дегенерация. Той се изразява в морфологични промени в клетките, образуване на многоядрени клетки (симпласти), пикноза на ядрото и пълно унищожаване на клетките. Макроскопски - отделяне на клетки от стените на епруветката.
За растежа на вируса в клетките може да се прецени с помощта на индикатор, добавен към хранителната среда. Ако се осъществи метаболизъм, рН на средата се измества в киселата страна и средата се оцветява жълто... Ако вирусът се умножи, клетките умират, рН се променя малко и запазва пурпурния си цвят.
Някои могат да бъдат определени с помощта на р-ти на гемаглутинация или гемадсорбция. Вирусите имат специални рецептори (гемаглугинини), с помощта на които се адсорбират върху еритроцитите и ги карат да се слепват (гемаглутинация).
10. Методи за откриване на вируса в клетъчната култура.
Цитопатичен ефект
Хемадсорбция
Цветен квартал
Метод на плака
Метод на флуоресцентни антитела
R-ция на гемаглутинация
Инфекция на животни, податливи на този вирус
P-ция на утаяване в агар
11. Цитопатичен ефект, дефиниция, класификация.
Цитопатичният ефект е клетъчна дегенерация, която възниква под въздействието на вирус, който се размножава в тъканната култура. Той се изразява в морфологични промени в клетките, образуване на многоядрени клетки (симпласти), пикноза на ядрото и пълно унищожаване на клетките. Макроскопски - отделяне на клетки от стените на епруветката.
Класификация:
1) Равномерно унищожаване на фини клетки
2) Фокална финозърнеста дегенерация
3) Набраздена дегенерация
4) Грубозърнесто равномерно унищожаване
5) Образуване на симпласт.
12. Методи за типизиране на вируси.
Определянето на типа вируси във вирусосъдържащ материал се основава на неутрализирането на вируса с типоспецифични серуми. Крайният резултат от реакцията може да се установи въз основа на следните признаци:
1) Неутрализиране на цитопатично действие
2) Неутрализиране на хемадсорбционната р -ция
3) Цветен тест
4) Забавена хемаглутинация
5) Сияние на клетки, съдържащи вируси. Влияние от специфични за типа флуоресцентни серуми
6) Неутрализация при опити с животни.
13. Същността на областта на хемадсорбцията.
Хемадсорбцията е адсорбция на еритроцити върху повърхността на клетките, засегнати от вируса. В епруветката с вируса се добавя суспензия от еритроцити. Разклатете епруветката. При вирусна хемадсорбция, еритроцитите са здраво фиксирани върху клетките и остават върху тях след 1-2 пъти измиване. Когато се адсорбират, еритроцитите образуват характерни клъстери.
14. Същността на метода за цветни проби.
По принцип фактът, че клетките в процеса на възпроизводство и растеж на клетките в среда на яма натрупват киселинни метаболитни продукти вътре, намалявайки рН на околната среда. В заразените тъкани метаболизмът се потиска; не се наблюдават промени в рН. За откриване се добавя Finol red. В алкална среда - червено, в кисела среда - жълто.
15. Същността на метода на плаките.
За получаване на изолирани колонии от вируса. Тя се основава на появата на обезцветени участъци от дегенериращи клетки в монозомата на заразени с вируса клетки. Тези петна - плаки - се образуват от една -единствена частица от вируса. Отглежда се монослой от клетки, средата се отстранява и средата се пълни с агар с неутрално червено. Там, където клетките растат, средата е кисела - розова, където клетките са умрели, средата няма да се промени.
16. Същността на областта на хемаглутинация за откриване на вируса.
Алантоичната течност се проверява за съдържание на вируси чрез аглутинация на пилешки еритроцити върху стъкло. Към капка ваксиниран материал се добавя суспензия от еритроцити. П-цията се извършва в рамките на 5 минути.
17. Методи на микробиологична диагностика вирусни инфекции.
1) вирусоскопско - откриване чрез електронна микроскопия на вириони или вътреклетъчни включвания. (18 )
2) откриване с помощта на имуноелектронна микроскопия.
3) вирусологично - изолирането на чисти култури с помощта на клетъчни култури или пилешки ембриони. (19 )
4) серологично - откриване на антивирусни антитела в серума на пациента.
5) биологичен - визията на лабораторни животни.
20. видове вирусни инфекции.
1) вирусни инфекции, с кратък престой на вируса в организма.
· Остра инфекция - завършва с възстановяване, формиране на придобит имунитет и освобождаване от вируса.
· Асимптоматична инфекция - протича без прояви и завършва с формиране на имунитет и освобождаване от вируса.
2) вирусни инфекции с дълъг престой на патогена в организма:
· Латентен - безсимптомно или с нормално размножаване на вируса и изолирането му по време на външна среда, или нормалният цикъл на размножаване на вируса е нарушен и вирусът продължава дълго време в организма
· Хронични - периодични състояния на реконвалесценция и рецидиви (обостряния)
·
Бавно - дълготрайно инкубационен период, дълъг прогресивен курс, завършващ с тежко разстройство или смърт. Типичен примерСПИН.
21. Характеристики и механизми на антивирусен имунитет.
1) интерферони и Т-убийци на клетки.
2) вирусите имат слаб антигенен ефект върху В-лимфоцитите
Ролята на макрофагите не е толкова фагоцитоза, колкото в обработката и представянето на антиген.
3) Антигенът не може да се свърже с пилотния протеин на вируса и да го блокира.Вирусната неутрализираща активност на антитялото се намалява.
4) Интерферони - потискат вътреклетъчното размножаване на вируси
5) Алфа инхибиторът - термостабилен субстрат, е част от алфа глобулини, предотвратява адсорбцията на вируси върху клетката, унищожава се от невраминидаза на орто- и парамиксовируси.
6) Бета-инхибитор- термолабилен мукопептид, е част от бета-глобулини, потиска възпроизводството на орто- и парамиксовируси.
7) Т -убийци - откриват и унищожават всички клетки, заразени с чужди антигени.
8) С-ма В и Т-лимфоцити-синтез на антитела. Т-помощниците синтезират и секретират фактори на активиране, пролиферация и диференциация на В лимфоцити. От В-лимфоцити се образуват клетки, образуващи антитела и клетки на паметта.
9) Защитната роля на антителата е, че те взаимодействат с вирусни рецептори, като изключват възможността за адсорбция на вируси върху клетъчната мембрана и по този начин неутрализират тяхната активност, което прави невъзможно проникването на вируса в клетката.
Основните защитни механизми са насочени към ограничаване и потискане на вирусното размножаване в клетките (с антибактериален имунитет - унищожаване на патогена).
Org-m на човек е имунизиран срещу патогени на болести по животните.
Неспецифични фактори антивирусен имунитет:
1) клетъчна реакция - липса на клетки, способни да поддържат възпроизводството на вируси;
2) неутрализиращ термично лабилен вирусβ- инхибитори - серумни липопротеини, способни да свързват вируса. Комплексът е крехък, разпада се след 2 часа под d-em трипсин,но това е придружено от необратимо инактивиране на вируса;
3) тяло t ° - при t ° - забавяне и потискане на възпроизводството на вируса;
4) фагоцитоза - вирусите са слабо фагоцитирани и не се унищожават от ензими.Но макрофаги фагоцитозаклетки заразен с вирус;
5) намеса на вируси - един вирус потиска възпроизвеждането на друг в клетката гостоприемник. Но това не винаги е така!
6) интерферонът е инхибитор на вирусното размножаване. Това е гликопротеин:α, β, γ, Тип I и Тип II. Интерферонът прекъсва излъчването вирусна РНКрибозоми на клетката гостоприемник и спира синтеза на протеини.
Специфични фактори
: AT - са представени от имуноглобулини.
22. Механизми на персистиране на вируси в организма.
Има следните видове постоянство:
1) латентен - дълготраен носител на вируса, който не напуска организацията и не се освобождава в околната среда. В някои случаи това е дефектът на вируса, когато той не може да даде пълноценно потомство. В други - вирусогения, когато е вградена вирусна нуклеинова киселина клетъчен геном, котката я потиска (херпес);
2) хроничен - периоди на подобрение и обостряне през годините. Вирусът периодично се освобождава в околната среда;
3) бавен - много дълъг инкубационен период (години). Характерна е вирусогенията - вирусът не е изолиран. Симптомите на заболяването, които водят до смърт, бавно се увеличават.
В лекцията:
1) вирусът е в дефектно състояние, не е в състояние да се размножава и да предизвиква ефективен имунитет
2) вирусът е в клетката под формата на свободен NK, недостъпен за действието на антителата
3) геномът на вируса е интегриран в хромозомата на целевата клетка (вирусогения).
23. Механизмите на проникване на вируса в клетката.
1). Сливане на суперкапсида на вируса с клетъчната мембрана. Има освобождаване на нуклеокапсида в цитоплазмата, последвано от внедряване на sv-във вирусния геном.
2) рецептор-медиирана ентоцитоза (пиноцитоза). Вирусът се свързва със специфични рецептори в областта на ямката. Той нахлува в клетката и се превръща в ограден везикул. Везикулът се слива с междинния везикул (ендозома), слива се с лизозомата. Нуклеокапсидът е в цитозола на клетката и се освобождава NK.
24. Къде в майсторска клеткаУмножават ли се ДНК и РНК -съдържащите вируси?
25. Етапи на взаимодействие на вируса с клетката.
1) Адсорбцията е задействащ механизъм, свързан с взаимодействието на специфични рецептори на вируса и гостоприемника (при грипния вирус - хемаглутинин, при вируса на човешката имунна недостатъчност - гликопротеин gp 120 - CD4 рецептори с Т -хелперни клетки, моноцити, макрофаги)
2) проникване - чрез рецептор -медиирана ендоцитоза (пиноцитоза) или чрез сливане на суперкапсида с клетъчната мембрана.
3) освобождаване на NK - „събличане“ на нуклеокапсида и активиране на NK
4) синтез на NK и вирусни протеини, т.е. подчинението на клетката гостоприемник s-m и тяхната работа по възпроизводството на вируса.
5) сглобяване на вириони - асоциацията на репликирани копия на вирусен NK с капсидния протеин.
6) освобождаването на вирусни частици от клетката, придобиването на суперкапсид от обвитите вируси.
26. Какво е Virogeny?
ВИРОГЕНИЯформа на съвместно съществуване на вирус с клетка, с разрез геномът на вируса е включен в хромозомата на клетката. При V. автономното размножаване на вируса не се случва и неговата нуклеинова киселина се репликира заедно с ДНК на клетката гостоприемник. Вирусите, причиняващи V. се наричат. умерен. Те включват бактериофаги. причиняващи лизогения, както и онкогенни вируси, под въздействието на които се наблюдават наследства в заразените клетки, промени (трансформация), проявяващи се в неограничения им растеж и делене. В трансформираните клетки геномът на вируса се съдържа под формата на вирусна ДНК - провирус. Специален случай на провирус е профагът.
27. Fur-m антивирусен d-I интерферон.
Интерферонът предизвиква "антивирусното състояние" на клетката - устойчивост на проникване или блокиране на вирусна репродукция. Блокадата на репродуктивните процеси по време на проникването на вируса в клетката се дължи на инхибирането на транслацията на вирусна иРНК. В същото време антивирусният ефект на интерферона не е насочен срещу специфични вируси, тоест интерферонине имат вирусна специфичност. Това обяснява универсално широкия им спектър на антивирусно действие. Интерфероните пречат на възпроизводството на вируси чрез активиране на клетъчни ензими - протеинкинази.
Интерферон-I - инхибира синтеза на вирусни протеини, като същевременно не влияе върху адсорбцията, проникването и „събличането“ на вирусите.
Интерферон-II
- инхибира възпроизводството на вируси, активира Т-клетките, моноцитите, макрофагите, блокира "събличането" на вирусите, нарушава метилирането на вирусна РНК.
28. какво представляват протоонкогенът и онкогенът?
Ракът се причинява от онкогенни вируси, те се интегрират в клетката и създават раков фенотип. Онкогенен вирусима ген на злокачественост - онкоген и неговият предшественик, който присъства в клетката на хора, бозайници, животни и птици - прото -онген.
Протоонкогените са семейство гени, които изпълняват жизненоважни функции в клетъчните норми. Необходим за регулиране на неговия растеж и размножаване. Продуктите на протогените са различни протеин кинази, които фосфорилират клетките чрез транскрипционни сигнални фактори.
Има 2 вида онковируси: 1) съдържащи онкоген, 2) не съдържащи онкоген.
Онкогенът, въведен в клетката, я дарява с ново качество, което й позволява да се размножава неконтролируемо в тялото, образувайки клонинг на ракови клетки.
Генна мутация в една от 2 -те клетъчни копия се наричаонкоген
, и неговият нормален алел епрото-онкоген
... Мутациите на протоонкоген в онкоген или прекомерното му активиране могат да доведат до растеж на тумора.
29. Форми на обмен на генетичен материал в бактерии.
30. Какво е конюгацията, нейният механизъм.
Конюгацията е обмен на хромозомни и плазмидни гени чрез установяване на контакт между донорски и реципиентни клетки с помощта на донорски ворси. Механизмът на конюгиране се контролира от конюгативни (донорски) плазмиди.
Същността на експеримента се крие във факта, че гените, които контролират способността да синтезират треонин и левцин, се прехвърлят от донорските клетки чрез конюгиране до клетки -реципиенти ауксотрофан за тези аминокиселини.
31. Какво е трансдукция, нейните механизми?
Трансдукцията е трансфер на гени от клетка донор в клетка реципиент с помощта на фаги.
1) общ - fur -m - процесът на вътреклетъчно размножаване на фаг в главата му може случайно да бъде включен вместо фагова ДНК фрагмент от бактериална ДНК, равен по дължина на фага. В процеса на фагово размножаване се появяват дефектни вириони, в които главите съдържат фрагмент от бактериална ДНК вместо собствена геномна ДНК. Фагите запазват инфекциозни свойства.
2) Специфични - те се различават от неспецифичните по това, че в този случай трансдуциращите фаги винаги пренасят само определени гени, а именно тези, които се намират в хромозомата на лизогенна клетка вляво от attL или вдясно от attR. Свързан с интегрирането на умерен фаг в хромозомата на клетката гостоприемник.
При неспецифична трансдукция фагът е само носител на генетичен материал; със специфичен фаг, той включва този материал в своя геном и го прехвърля, лизогенизирайки бактериите, към реципиента.
32, 33. Плазмиди.
Плазмиди - най -простите живи същества, лишени от протеинова мембрана и представени само от набор от организирани гени, които определят техните специфични свойства, наследственост, както и допълнителни характеристики, които те даряват с клетката носител.
Плазмидите се подразделят но конюгативна, т.е. способни на самопренасяне и неконюгиращи, чието прехвърляне се осъществява от конюгативни плазмиди. Предаването на плазмиди сред бактериите става както вертикално, така и хоризонтално, осигурявайки тяхното епидемично разпространение.
Това са екстрахромозомни генетични елементи (фрагменти от ДНК), които съдържат генетичен материал. Те се намират в цитоплазмата. Насладете се на светеца репликон.
Не се изискват генетични структури. Те обаче могат да прехвърлят доста важни свойства на клетките:
1) способността за предаване на гени. донорен материал за конюгиране - F -плазмид;
2) лекарствена резистентност - R -плазмид;
3) синтез на бактериоцини (причиняват смъртта на бактерии от същия или подобен вид) - Col -плазмид;
4) синтез на токсини - Ent -плазмид;
5) синтез на хемолизини - Hly -плазмид.
Има плазмиди, които не се проявяват фенотипно - това са скрити (криптични) плазмиди.
Всички плазмиди са разделени на:
1) конюгативна - прехвърлят собствената си ДНК от донорската клетка в реципиентната клетка по време на конюгацията;
2) неконюгативни - не понасят.
По време на клетъчното делене плазмидите са равномерно разпределени между дъщерните клетки. Плазмидите са фактори, които увеличават жизнеспособността на бактериите в организма на гостоприемника и околната среда.
34. Бактериофаги. Техният химичен състав и морфология.
Бактериофагите са бактериални вируси. Бактериофагията е процес на взаимодействие на фаги с бактерии, което много често завършва с тяхното унищожаване.
Фагите имат всички биологични характеристики, които имат вирусите. Геномът е представен или от ДНК, или от РНК и е затворен в протеинова обвивка (капсид), чиито структурни субединици са сгънати според типа спирална или кубична симетрия, Големите имат опашка.
Те са стабилни в диапазона на рН от 5 до 8, не се инактивират от студени водни разтвори на глицерин и етилов алкохол, не се влияят от такива ензимни отрови като цианид, флуорид, хлороформ и др. добре запазени в запечатани ампули, но лесно унищожени при кипене, действието на киселини, химически дезинфектанти.
35. Видове инфекции, причинени от фаги. Техните характеристики.
Б., в зависимост от вида на инфекцията, причинена от бактерията, се дели на вирулентна и умерена.Вирулентен
Б. дават литична продуктивна инфекция, в резултат на която нова генерацияфаги. Литичният цикъл се състои от фазите на адсорбция на фагови частици върху рецепторите на клетъчната стена, клетъчна инфекция с геном или цял фаг, репликация на генома и синтез на главни и процесни протеини, сглобяване на фагови частици и фагово освобождаване с лизис на бактерията гостоприемник. В течна среда лизисът се проявява чрез просветляване на бактериите. суспензии, върху плътна среда - образуването на зони с липса на растеж, към -ръж се наричат "стерилни" петна, плаки или отрицателни колонии. Размерът и формата на тези образувания имат диференциално -диагностична стойност. При продължително култивиране на бактерии в присъствието на вирулентен фаг, в популацията се появяват фагоустойчиви варианти, които дават вторичен растеж по време на процеса на селекция, проявен чрез замъгляване на предварително прозрачна среда в епруветка или появата на бактерии на "стерилни" места. колонии.Умерен
Б. причиняват, като правило, абортивна лизогенна инфекция, ръбовете се състоят в интегрирането на геномите на бактериите и лизогенния фаг (вж.Лизогения).
Продуктивна инфекция се наблюдава само при изолирани индивиди от бактерии. население. С индуцирането на UVL или други индуктори броят на индивидите с продуктивна инфекция рязко се увеличава. Б. се характеризират със спецификата на действието. Техният литичен спектър може да обхване всички индивиди от определен вид. Такива фаги се наричатуниверсален прав поливалентен;
те се използват за идентифициране на съответните бактерии, както и за целите на фаговата терапия и фаговата профилактикаТипично
фагите са в състояние да лизират само група индивиди от определен вид (фаговар), на която се основава типизирането на бактерии (вж.фагов тип).
В допълнение, Б. се използва като модел за изучаване на различни въпроси на биологията и генетиката. Те могат да бъдат пагубни за индустриите въз основа на отглеждането на микроорганизми.
36. Каква е разликата между вирулентен и умерен фаг?
Вирулентен - причинява лизис на бактерии, заразени с него, може да съществува само като вегетативен или зрял b. причинява репродуктивна форма на инфекция.
Умерен - геномът на който е интегриран и репликиран с генома на бактерията гостоприемник, може да съществува в него под формата на профаг.
37. Какво е лизогения? Лизогенно преобразуване?
Лизогения - способността на различни бактериални щамове, съдържащи бактериофаги, да лизират други бактериални щамове, без да бъдат унищожени.
Геномът на бактериите иумерен фаг съжителстват като единична хромозома, в която фаговата ДНК е включена в бактериалната хромозомна ДНК. Наследява се от дъщерни клетки, фаговият геном се освобождава с последващ лизис на бактерията.
Лизогенна конверсия - свързването на фагова ДНК с бактериалния геном причинява промяна в морфологията и антигенните sv-in бактерии.
38. Етапи на действие на Т-равномерен фаг с бактериална клетка?
С помощта на опашката си фагът разпознава специфичен за него рецептор на повърхността на бактериалната клетъчна стена и се прикрепя към нея. Плочата с шиповете е прикрепена към стената, причинявайки лизис на мястото на закрепване. Едновременно с Ca йони 2+
активира АТФазата, съдържаща се в протеините на обвивката, и обвивката се свива. В резултат на това пръчката пробива клетъчната стена в зоната, разрушена от лизозима и цитоплазмената мембрана.
39.
за какво се използват фагите в медицинската практика?
За:
· диагностика, която се състои в изолиране на фага от тялото на пациента
· фагово типизиране
· фаго идентифициране на бактериални култури с цел установяване на техния вид
· фаготерапия - лечение на някои инфекциозни заболявания
·
фагова профилактика - профилактика на определени заболявания
40. какво е фагово типизиране?
метод за определяне на принадлежността на избрани и идентифицирани към тип разрез към един или другфаговар (см.). Използвайте 2 комплекта. Същността на първия е да се установи sv-in, получен от лизогенен разрез на фаги (литичен спектър, антигенна специфичност и др.). Същността на втория, по -често срещан подход се основава на идентифициране на спектъра на чувствителност на избрания разрез към набор от стандартни типични фаги. Ако фаговарът на разреза съответства на типичен фаг, настъпва лизис на разреза, който се проявява при липса на растеж, докато на мястото на прилагане на други фаги се наблюдава непрекъснат растеж на микроби.
Това са микроскопични организми, които могат да причинят заболяване, както при хора, така и при животни или растения. Въпреки че бактериите и вирусите могат да имат някои Основни характеристики, те също са много различни. Бактериите обикновено са много по -големи от вирусите и могат да се видят с конвенционален микроскоп. Вирусите са около 1000 пъти по -малки от бактериите и се виждат само под електронен микроскоп. Бактериите са едноклетъчни организми, които се размножават независимо от други организми. Вирусите се нуждаят от жива помощ, за да се размножават.
Къде се срещат?
Бактерии:бактериите живеят почти навсякъде, включително във / върху други организми и върху неорганични повърхности. Някои бактерии се считат и могат да оцелеят в изключително сурова среда, като хидротермалните отвори и стомасите на животни или хора.
Вируси:Подобно на бактериите, вирусите могат да бъдат намерени в почти всяка среда. Те са способни да заразят животни и растения, както и бактерии и. Вирусите, които заразяват екстремофили като археите, имат генетични адаптации, които им позволяват да издържат на тежки условия околната среда... Вирусите могат да продължат (от няколко секунди до няколко години) върху повърхности или предмети, които използваме всеки ден.
Бактериална и вирусна структура
Бактерии:бактериите са прокариотни клетки, които показват всички характеристики на живите организми. Бактериалните клетки съдържат ДНК и са потопени и заобиколени. Тези органели действат жизненоважно важни функциипозволявайки на бактериите да получават енергия от околната среда и да се размножават.
Вируси:Вирусите не се считат за клетки, но съществуват като частици от нуклеинова киселина (ДНК или РНК), затворени в протеинова обвивка. Известни също като вириони, вирусните частици съществуват някъде между живите и неодушевени организми... Въпреки че съдържат генетичен материал, те нямат клетъчна стена или органели, необходими за производство и възпроизвеждане на енергия. Вирусите разчитат единствено на клетката гостоприемник за репликация.
Размер и форма
Бактерии:Бактериите могат да бъдат намерени в различни форми и размери. Общи формибактериалните клетки включват коки (сферични), бацили (с форма на пръчка), спирала и вибриони. Бактериите обикновено са с размер между 200 и 1000 нанометра. Най -големите бактериални клетки са видими с просто око. Най -големите бактерии в света са: Thiomargarita namibiensis, достигащи до 750 000 нанометра (0,75 милиметра) в диаметър.
Вируси:размерът и формата на вирусите се определят от количеството нуклеинова киселина и протеините, които съдържат. Вирусите обикновено имат сферични (полиедрални), пръчковидни или спирални капсиди. Някои вируси, като например, имат сложни формикоито включват добавяне на протеин, прикрепен към капсида с влакна на опашката, простиращи се от опашката. Вирусите са много по -малки от бактериите. Обикновено те са с размери от 20 до 400 nm в диаметър. Най-голямата известни вируси, pandoraviruses, са с диаметър около 1000 нанометра.
Как се възпроизвеждат?
Бактерии:бактериите обикновено се размножават чрез процес, известен като. В този процес една клетка се репликира и разделя на две еднакви клетки. При подходящи условия бактериите могат да растат експоненциално.
Вируси:за разлика от бактериите, вирусите могат да се размножават само с помощта на клетка гостоприемник. Тъй като вирусите нямат органелите, необходими за възпроизвеждане на вирусни компоненти, те трябва да използват органелите на клетката гостоприемник за репликация. При вирусна репликация вирусът инжектира своя генетичен материал (ДНК или РНК) в клетката. Вирусите се репликират и съдържат инструкции за създаване на вирусни компоненти. Веднага след като компонентите се съберат и новообразуваните вируси узреят, те разкъсват клетката и продължават да заразяват други клетки.
Заболявания, причинени от бактерии и вируси
Бактерии:докато повечето бактерии са безвредни, а някои дори са полезни за хората, други бактерии могат да причинят заболяване. Патогенните бактерии, които причиняват заболяване, произвеждат токсини, които унищожават клетките в тялото. Те могат да причинят хранително отравяне и други сериозни заболявания, включително менингит, пневмония и туберкулоза. Бактериалните инфекции могат да бъдат лекувани с антибиотици, които са много ефективни при унищожаването на бактерии.
Въпреки това, поради прекомерната употреба на антибиотици, бактериите са придобили резистентност към тях. Някои от тях дори станаха известни като супербактерии, защото придобиха резистентност към много съвременни антибиотици. Ваксините също са полезни за предотвратяване на разпространението на бактериални заболявания. Най -добрият начин да се предпазите от бактерии и други микроби е да миете ръцете си правилно и често.
Вируси:вирусите са тези, които причиняват редица заболявания, включително варицела, грип, бяс, Ебола, Зика и ХИВ / СПИН. Вирусите са способни да причинят персистиращи инфекции, при които те са в покой и могат да бъдат реактивирани по -късно.
Някои вируси причиняват промени в клетките гостоприемници, които водят до развитие на рак. Известно е, че тези вируси причиняват рак като рак на черния дроб, рак на шийката на матката и лимфом на Бъркит. Антибиотиците не действат срещу вируси. Лечението на вирусни инфекции обикновено включва лекарства, които лекуват симптомите на инфекцията, а не самия вирус. Обикновено имунната система се бори сама с вирусите. Ваксините могат да се използват и за предотвратяване на някои вирусни инфекции.
Ако откриете грешка, моля, изберете част от текста и натиснете Ctrl + Enter.
Вирусите са своеобразна форма на живот, която има всички свои характеристики:
способността да се възпроизвежда;
наследственост - способността да се предават основните свойства на потомците;
генетична променливост;
адаптация към конкретен хост;
способността да причинява инфекция, да се размножава в клетката гостоприемник;
вирусният геном функционира според общите закони на генетичния код.
Вирусите принадлежат на жив, но те не могат да се нарекат орг-мами. Разлики от живитесистеми:
малък размер;
много проста структура на вириона - геномът (ДНК или РНК) и капсидът (протеинова обвивка);
без клетъчна структура - без цитоплазма, мембрани, рибозоми (без мобилизация на енергия и синтез на протеини);
вирионът има само 1 вид нуклеинова киселина - вие - ДНК или РНК;
неспособни за растеж и бинарно делене;
са в състояние да комбинират своя геном с генома на клетката гостоприемник;
не може да съществува без клетка гостоприемник;
може да има фрагментиран геном.
Те се размножават, като се възпроизвеждат от собствената си геномна нуклеинова киселина към - вас.
Вироиди- се състоят само от малки РНК молекули (~ 300-400 нуклеотиди).
Приони- инфекциозни протеинови частици, водещи до развитие на фатални неврологични заболявания.
Какво е вирион, капсид, нуклеокапсид, тип симетрия, суперкапсид.
Вирионът е пълноценна вирусна частица, състояща се от нуклеинова киселина и капсид, разположена извън жива клетка.
Нуклеокапсидът се състои от nuc to - you и протеинова обвивка, т.е. капсид.
Симетричен тип - начин на пространствено опаковане на капсомери спрямо NC и др. (Спирални, кубични, смесени).
Спирално - нишковидни вируси - протеинови субединици са подредени в спирала, а между тях NK. Защитете NK по -добре, но се изисква повече протеин, отколкото с кубик.
Кубичен - базиран на различни комбинации от равностранни триъгълници, образувани от комбинация от сферични протеинови субединици. Когато се комбинират, те могат да образуват затворена сферична повърхност. Икосаедите имат 20 лица, най -често се срещат 12 върха, т.к най -ефективната и икономична симетрия.
Суперкапсидът е външната обвивка на сложно организирани вируси, състояща се от два слоя липиди (СМ на клетката гостоприемник) и затворени в тях гликозилирани суперкапсидни вирусни протеини, които стърчат над повърхността на вириона под формата на своеобразни бодли. Гръбнаците изпълняват функции: разпознават клетъчните рецептори и се свързват с тях, осигуряват сливането на вирусната мембрана с клетъчната мембрана и нейните лизозоми, насърчават разпространението на вируса в тялото поради сливането на клетките и имат защитни антигени.
Критерии за класификация на вирусите.
Размножаване в тъканни култури: характеристики на репликация.
Обхватът на засегнатите гостоприемници: особености на патогенезата на инфекциозния процес; онкогенна св-ва.
Устойчивост на физични и химични фактори (гама лъчи, термично инактивиране при 37 и 5 o C, действието на мастни разтворители и отделни катиони).
Антигенен sv-va.
NA: вид, брой нишки, процент, молекулно тегло, съдържание на гуанин и цитозин.
Морфология: вид симетрия, брой капсомери, наличие на външна липопротеинова мембрана, форма, размер на вирионите.
Биофизични свойства: константа на утаяване, плувна плътност.
Протеини: броят на структурните протеини и тяхната локализация, както и техният състав.
Видове вирусни геноми.
РНК геноми
Едноверижна единична РНК с матрична активност (положителна РНК) - вирус на полиомиелит
Едноверижна единична РНК без матрична активност (отрицателна РНК). Вирионът има транскриптаза - парамиксовируси, рабдовируси.
Едноверижна фрагментирана РНК без матрична активност (отрицателна РНК). Вирион има транскриптаза - ортомиксовирус.
Двуверижна фрагментирана РНК. Вирион има транскриптаза - реовируси.
Вируси, чийто геном е представен от две идентични нишки на положителна РНК (диплоиден геном). Вирионите имат транскриптаза - ретровируси.
ДНК геноми
Едноверижна линейна ДНК - парвовируси.
Едноверижна кръгова ДНК - фаги
Двуверижна линейна ДНК - херпесен вирус.
Двуверижна кръгова ДНК - паповавируси, хепетит В вирус
Двуверижна ДНК с ковалентно свързан терминален хидрофобен протеин - аденовируси.
Двуверижна ДНК, затворена във всеки край от ковалентна връзка - вирус на едра шарка.
5. Методи за отглеждане на вируси
Клетъчни култури.Клетъчните култури се приготвят от животински или човешки тъкани. Културите се подразделят на първични (нетрансплантируеми), полутрансплантируеми и трансплантируеми.
Непрекъснатите еднослойни клетъчни култури се приготвят от злокачествени и нормални клетъчни линии, които имат способността да се размножават in vitro за дълго време при определени условия.
Пилешки ембриони.Пилешките ембриони, в сравнение с клетъчните култури, имат относително висока жизнеспособност и устойчивост на различни влияния, използват се ембриони на пилета на 8-12 дни.
Лабораторни животни.
Предимството на този метод пред други е способността да се изолират онези вируси, които са слабо възпроизведени в култура или ембриони. Неговите недостатъци включват замърсяване на тялото на експериментални животни с външни вируси и микоплазми, както и необходимостта от последващо заразяване на клетъчната култура за получаване на чиста линия от този вирус, което удължава периода на изследване.
6. Инфекция на лабораторни животни.Правила, методи.
Методите за заразяване на животни са различни: интраперитонеална, интравенозна, интрамускулна, интраназална, мозъчна инфекция и други.
Инфекция в мозъка... (Методът се използва при работа с невротропни вируси). За инфекция по -често се използват бели мишки. С лявата ръка притискат здраво мишката към масата, с палеца и показалеца издърпват скалпа назад. С помощта на туберкулинова спринцовка с предпазен съединител на иглата пробийте челната кост малко странично средна линияи се инжектира 0,02-0,03 ml материал. Иглата се вкарва на дълбочина 1,5-2 мм, като същевременно се усеща "потапяне" в черепната кухина.
Преди заразяване мястото на инжектиране се обработва внимателно 3% алкохолен разтвор на йодподрязване на палтото, ако е необходимо. Подкожнозаразяват чрез повдигане на кожната гънка в гърба, лопатката, колянната гънка, шията. Интрадермалнометодът се състои в въвеждане в дебелината на горния слой на кожата в плантарната повърхност на задния крайник по посока от пръстите към глезенната става. В мускула на бедрото гърдите се заразяват, когато мускулноадминистриран. Често при мишки се използват плъхове интраперитонеалноинфекция, като същевременно фиксира животното с главата надолу. При интравенозноинфекция на мишки, плъхове в страничната вена на опашката, морски свинчета - в сърцето в областта на мечовидния процес, зайци - в маргиналната вена на ухото, птици - в аксиларната вена, важно е да се контролира така че въздушните мехурчета не влизат във вената от спринцовката. Отпред интраназалночрез заразяване на животни (с изключение на зайци), за да се избегне кихане и пръскане на ваксиниран материал, се прави дълбока етерна анестезия.
7. Инфекция на пилешки ембриони. Правила, методи.
За употреба при инфекция ембриони на възраст 5-11 дни... Преди инфекцията ембрионите се изследват в тъмна стая с помощта на овоскоп, за да се провери тяхната жизнеспособност (живите ембриони са подвижни с добре развити съдове) и въздушна камера и местоположението на ембриона. Мястото на масата, където се извършват манипулациите, е покрито със салфетка, потопена в разтвор на хлорамин.
Инфекция с хорионлантоидна мембрана... Яйцето се поставя в стойка във вертикално положение с тъпия край нагоре. Черупката над въздушната камера се обработва със спирт, йод, отново със спирт, изгаря се, пробива се с ножица малък отвор, през който един клон се въвежда в кухината на въздушната възглавница и черупката над нея се отрязва. След това с анатомична пинсета те хващат в склада и внимателно отстраняват вътрешния слой на мембраната на черупката. Под него е хорионалантоичната мембрана, върху която се нанася изпитваният материал в количество 0,2-0,5 ml с пастьорова пипета. Отворът на черупката се затваря със стерилна стъклена капачка, която се фиксира към яйцето с разтопен парафин. Замърсеното яйце се поставя в термостат при 37 0 за 48 часа.
3 инфекция в алантоичната кухина... След подготвителната работа, черупката се пробива през въздушната камера и през малък отвор материалът се инжектира с игла за спринцовка на дълбочина 1-1,5 cm в обем 0,1-0,2 ml. Дупката се пълни с парафин.
Инфекция в амниотичната кухина. След отстраняване на черупката над въздушната камера клоните на пинсетата се въвеждат в алантоидната кухина по посока на ембриона на дълбочина 2-2,5 см, околоплодната мембрана се улавя, отстранява на дълбочина, пробива се с игла на спринцовка, и 0,1 ml материал се инжектира в амниотичната кухина. Дупката в черупката е затворена и восъчна.
Инфекция в жълтъчния сак... (Този метод се използва за изолиране на рикетсии). Изпитваният материал се инжектира в 5-8-дневни ембриони с дълга игла (4-5 см) през малък отвор в черупката над въздушната камера на дълбочина 2-3 см. В този случай ембрионът не трябва да се поврежда. По време на манипулацията тя трябва да е под жълтъчния сак. Погледнете с овоскоп, маркирайте границата на въздушната камера и местоположението на ембриона. Инжектирайте вируса vaccinia в хорионлантоисната мембрана или грипния вирус в алантоичната кухина.
